Радикальным методом лечения многих тяжелых гематологических болезней является трансплантация стволовых клеток, которые выделяют из ткани костного мозга или крови. Осуществить его возможно путем поиска подходящего донора, что довольно не просто. Вероятность существования неродственного донора, совместимого по HLA-антигенному составу, составляет 1:100000. Для этого необходимы целые регистры типированных доноров, исчисляемые несколькими сотнями тысяч человек. Частично решить эту проблему помогает заготовка пуповинной крови.
Клиническое использование
Кровь, полученная из плаценты, является богатым источником гемопоэтических клеток. Концентрация колониеобразующих единиц в ней значительно превышает их количество в крови взрослого человека даже после стимуляции факторами роста. Она приближается по своему составу к костномозговой ткани. Поэтому стволовые клетки, содержащиеся в пуповинной крови, могут успешно применяться в гематологии для лечения следующих заболеваний:
- острые лейкозы;
- апластические анемии;
- миелодиспластические синдромы;
- неходжкинские лимфомы;
- макроглобулинемия Вальденстрема;
- некоторые врожденные заболевания (анемия Фанкони, наследственные гемоглобинопатии, синдром Барра и др.).
Трансплантация гемопоэтических клеток, полученных из плацентарной крови, является перспективным направлением в медицине, которое уже применяется в неврологии (последствия травм, дегенеративные заболевания нервной системы), ревматологии (диффузные болезни соединительной ткани), онкологии и других отраслях.
Эффективность такого лечения определяется:
- своевременностью диагностики и лечения заболевания;
- степенью гистосовместимости (по системе HLA) донора и реципиента;
- возрастом больного (дает хорошие результаты у детей младше 5 лет);
- количеством пересаженных стволовых клеток (если их мало, то повышается риск рецидива патологического процесса или несостоятельности трансплантата).
Заготовка
Пуповинную кровь получают во время родов через естественные родовые пути или путем кесарева сечения. На этапе планирования процедуры беременную женщину всесторонне обследуют и исключают у нее заболевания инфекционной природы (вирусные гепатиты, ВИЧ, сифилис и др.).
Готовясь к родам, в асептических условиях подготавливают систему для забора крови. Она состоит из специального контейнера с гемоконсервантом и устройством для взятия крови.
При нормальных родах через естественные родовые пути забор крови может осуществляться в двух вариантах:
- Если плацента находится в полости матки и еще не отделилась, то эксфузия крови выполняется после наложения зажима на пупочный канатик и отделения новорожденного от плодного места. Для этого пуповину тщательно обрабатывают растворами антисептиков, после чего производят пункцию пупочной вены, располагая емкость для сбора материала на 50-70 см ниже живота роженицы, чтобы кровь стекала в нее самопроизвольно.
- Если плацента уже выделена из полости матки, то ее располагают на специальной рамке плодной частью книзу, затем также обрабатывают и пунктируют вену пупочного канатика, после чего получают кровь в контейнер.
Из артерии пупочного канатика дополнительно берется 10 мл крови для первичного этапа обследования на принадлежность к группе крови и скрытые инфекции.
После окончания процедуры контейнер отсоединяют и транспортируют в банк пуповинной крови в специальном холодильнике или дополнительном контейнере, защищенном от перепада температур. При этом длительность хранения крови с гемоконсервантом до ее фракционирования не должна превышать 24 часов. Иначе стволовые клетки гибнут.
Хранение стволовых клеток
Выделение гемопоэтических клеток из пуповинной крови проводится в асептических условиях.
- Для этого кровь подвергается центрифугированию на высоких оборотах, в результате чего от нее отделяется плазма.
- После этого приступают к осаждению эритроцитов путем добавления седиментирующего вещества (желатин, гидроксиэтилкрахмал).
- Полученную клеточную взвесь смешивают с физиологическим раствором и дважды центрифугируют.
- Затем с помощью шприца отделяют клеточный осадок и подготавливают его к заморозке и длительному хранению.
Полученные из пуповинной крови стволовые клетки хранятся при низких температурах в замороженном состоянии:
- в холодильных камерах с температурой -80 градусов (до 6 месяцев);
- в парах жидкого азота при температуре -150 градусов (несколько лет);
- в емкостях с жидким азотом и температурой -196 градусов (более 20 лет).
Для замораживания клеточной взвеси ее предварительно охлаждают до +4 градусов на ледяной бане или в условиях холодильника. Затем шприцом набирают эту взвесь и переносят ее в мешок для консервирования, добавляя по каплям ограждающий раствор, после чего мешок запаивается и помещается в специальный аппарат для программного замораживания. При этом сам процесс осуществляется по четырехступенчатой программе, что позволяет сохранить жизнеспособность клеток в течение длительного времени.
Для использования замороженных образцов стволовых клеток непосредственно перед трансфузией производится медленное размораживание клеточной взвеси на водяной бане с температурой +40 градусов. После тщательного перемешивания выполняется исследование на сохранность клеток и их жизнеспособность.
Лабораторное тестирование
Применение в клинической практике крови, полученной из пуповины, требует специального тестирования в условиях лаборатории. Это позволяет определить принадлежность по HLA-системе, оценить качество препарата и выявить потенциальную возможность заражения инфекционными заболеваниями.
Перечень необходимых лабораторных анализов включает:
- определение объема пуповинной крови и содержания в нем клеточных элементов (стволовых клеток, лейкоцитов, эритроцитов);
- анализ крови на маркеры вирусных гепатитов;
- биохимическое исследование крови (печеночные пробы);
- выявление антител к ВИЧ, бледной трепонеме, токсоплазме, цитомегаловирусу;
- посев крови на стерильность;
- определение HLA-генотипа, группы крови по системе АВ0 и резус-фактору.
Для проведения всех исследований в полном объеме необходимо около 10 мл крови. Из них 4 мл сразу берут для тестирования, а остальные 6 мл центрифугируют и замораживают, после чего снова исследуют. Это дает возможность оценить качество трансплантата и прогнозировать время приживления кроветворных клеток в организме больного.
Пуповинную кровь для исследований используют очень экономно с целью минимизации потерь гемопоэтических клеток.
- Определение групповой принадлежности, HLA-фенотипа, биохимических показателей производится в порции крови, взятой из артерии пуповины.
- Бактериологическое исследование осуществляется в оставшейся после центрифугирования эритроцитарной массе.
- Серологические исследования сыворотки крови с целью выявления инфекций проводят с использованием плазмы, полученной в процессе фракционирования.
- Оценка концентрации клеток-предшественников гемопоэза производится в клеточном осадке, полученном путем разделения крови на фракции.
Преимущества и недостатки использования пуповинной крови
В настоящее время многие родители задумываются о том, стоит ли заготавливать пуповинную кровь ребенка, важно это или нет? Для того чтобы ответить на эти вопросы, рассмотрим преимущества этого метода лечения.
- Процедура является абсолютно безопасной (не наносит вред здоровью матери и ребенка).
- Не требует дополнительного обезболивания.
- Имеет низкий риск заражения инфекционными заболеваниями.
- Предоставляет возможность длительного хранения гемопоэтических клеток.
- Обеспечивает биологическое страхование жизни ребенка при развитии у него тяжелых заболеваний (особенно кроветворной системы).
Однако существуют и недостатки применения пуповинной крови как источника стволовых клеток.
- Основным из них является относительно небольшой объем получаемого материала и потери его при заготовке и лабораторном тестировании.
- Еще одним недостатком этой процедуры является ее высокая стоимость при небольшой вероятности применения у ребенка. Однако она малосопоставима со стоимостью пересадки костного мозга, которая исчисляется десятками тысяч долларов.
В настоящее время в России и других странах существуют специальные банки пуповинной крови. Это могут быть частные и государственные структуры. Последние преследуют цели создать определенный запас биологического материала, который может использоваться для научных исследований и лечения больных.
Частные банки занимаются хранением именных образцов, которыми можно воспользоваться в случае болезни. Они предлагают своим клиентам различные тарифы:
- Средняя стоимость забора и хранения пуповинной крови в Гемабанке составляет 65000 рублей, отдельно оплачивается каждый год хранения (7000 рублей).
- В банке стволовых клеток «Криоцентр» пакет хранения стволовых клеток (25 лет) имеет общую стоимость около 230 000 рублей.
Заключение
Заготовка пуповинной крови как источника стволовых клеток важна не только для планируемой или возможной родственной трансплантации. Это помогает в решении проблемы поиска гистосовместимого трансплантата для детей, страдающих фатальной патологией органов кроветворения и других систем организма.
О пуповинной крови рассказывает врач Виолетта Фролова:
(голосов - 1, среднее: 5,00 из 5)
Загрузка...